Зміст
ПЛР є методом, що використовується вченими для створення мільйонів копій сегмента ДНК. Полімерази - тип білкового ферменту - допомагають виробляти нові сегменти. Вчені часто використовують Taq-полімеразу в ПЛР.
Історія
Полімераза Taq походить від бактерії Thermus aquaticus, яка живе в термальних водах. Карі Мулліс і Фред Фалуна розробили ПЦР в середині 1980-х років, використовуючи спочатку полімераз Escherichia coli, але вчені незабаром почали використовувати Taq в ПЛР, оскільки він був більш стійким до високих температур.
Функція
ПЛР включає стадії денатурації, відпалу і реплікації, зазвичай повторюються від 20 до 30 разів. Денатурація відокремлює подвійну нитку ДНК в ізольованих нитках. На етапі відпалу праймери зв'язуються з сегментами ДНК, які потрібно копіювати. Taq-полімераза починає працювати на етапі реплікації: полімераза збирає, з кожної однієї нитки ДНК, позначеної праймером, нову подвійну нитку.
Переваги
Високі температури, необхідні для денатурації ДНК, знищили полімеразу Е.coli, спочатку використовувану в ПЛР, що вимагало додавання додаткового ферменту до кожного циклу. Taq-полімераза може витримувати ці температури, тому вчені можуть автоматично робити кілька циклів ПЛР.
Міркування
Taq-полімераза має відносно високий коефіцієнт помилок подвоєння ДНК. Інші полімерази, стабільні при високих температурах, мають меншу частоту помилок, але Taq все ще є найбільш часто використовуваним через його надійність і універсальність.