Зміст
Електрофорез в агарозному гелі є науковою процедурою, що використовується в дослідницьких і діагностичних проектах, що передбачають вивчення нуклеїнових кислот. Вона дозволяє вченому або техніку відокремлювати заряджені молекули нуклеїнової кислоти, такі як ДНК, відповідно до їх розміру, і використовується для аналізу продуктів, отриманих в результаті експерименту, таких як полімеразна ланцюгова реакція. Він зазвичай використовується тому, що він є недорогим для виконання, швидким процесом і дозволяє відновити аналізовану нуклеїнову кислоту.
Виготовлення гелю
Зберіть всі необхідні предмети і очистіть їх 70% етанолом. До предметів відносяться лоток з ливарним гелем, клейка стрічка, лабораторна агароза, колби або циліндри, 10х концентрація (трис-борат-ЕДТА, ТВЕ), буфер, бромистий этидий, барвник і зразок для аналізу. Також переконайтеся, що у вас є резервуар для гель-електрофорезу та джерело живлення. Агарозу готують шляхом зважування відповідної кількості стрічки ДНК, що підлягає аналізу, змішування її з буфером TBE і плавлення в мікрохвильовій печі. Як правило, 1% до 2% розчину достатньо для покриття багатьох ниток ДНК, вивчених у щоденній молекулярній біології. Малі ДНК вимагають більш концентрованих гелів, тоді як більші з них потребують більш розбавлених гелів. Розчин агарози змішують з бромидом этидия, який зв'язується з нуклеїновою кислотою під час процедури електрофорезу. Цей розчин вливають в розплавлений лоток гелю, так само, як вставляють формувальну гребінку, і суміш залишають для застигання.
Вставте і активуйте гель
Гель видаляють з лотка і занурюють в резервуар гель-електрофорезу, що містить пробіжний буфер. Зразки для аналізу змішують з барвниками і поміщають в лунки гелю, створеного гребінцем. Маркер або шкала також включені, щоб дозволити досліднику побачити хід електрофорезу і визначити розмір утворених фрагментів. Потім до гелю наносять електричний струм, який змушує зразок мігрувати від одного кінця гелю до іншого. Під час цього процесу нуклеїнові кислоти у зразку розділяються на фрагменти різних розмірів, при цьому великі молекули наближаються до свердловини, а менші молекули рухаються до іншого кінця гелю.
Аналізують гель
Після завершення процедури електрофорезу гель видаляють з резервуара і поміщають в УФ-трансилюминатор, який освітлює фрагменти нуклеїнової кислоти, які зв'язуються з флуоресцентним бромистым этидием. Зроблено фотографію, і смуги нуклеїнових кислот можуть бути виміряні відповідно до відстані, яка мігрувала через гель. Шкала розділить їх на смуги відомих розмірів і може бути використана для керівництва дослідника під час аналізу.