Як зробити агарозні гелі

Відеоролик: плазма белки а также протромбин время: LFTs: Часть 4

Зміст

Інструкції
Приготування гелю агарози
Повідомлення
Що вам потрібно

Агарозні гелі зроблені вченими, що працюють в лабораторіях молекулярної біології, для вивчення фрагментів ДНК, які модифікуються під час експериментальної роботи. Техніка виготовлення агарозного гелю є фундаментальним рутинним навиком, який необхідно освоїти всіма дослідниками, оскільки він дозволяє безпосередньо візуалізувати різні розміри ДНК для верифікації та проектів клонування генів. Хоча приготування гелю не є складним завданням, як і всі лабораторні процедури, його слід пробувати тільки фахівцям, який науково підготовлений через біологічні ризики.

Інструкції

Як зробити агарозні гелі (Зображення Comstock / Comstock / Getty Images)

Приготування гелю агарози

Переконайтеся, що гелеві основи не мають тріщин або що-небудь, що може призвести до витоку гарячої агарози. Лотки очистити 70% спиртом і повністю висушити. Основа має два відкритих кінця і два закритих кінця. У деяких форматах кліпи надаються разом з тим, щоб закрити кінці, але більшість їх повинна бути запечатана, поставивши смужки між відкритими частинами. Натисніть на стрічку міцно і надійно, оскільки вони можуть відійти від тримача і дозволити просочувати гарячу агарозу.
Виходячи з розміру фрагмента ДНК, який потрібно відокремити і проаналізувати на агарозному гелі, визначають відповідний відсоток, який буде необхідний. Наприклад, при 1% (мас. / Об.) Агарозний гель буде ефективним для аналізу 0,5-10 кб сегментів ДНК. Чим вище відсоток (більше агарози), тим менше фрагментів, які можна розділити. Рутинні експерименти використовують діапазон від 0,5% до 2% агарози. Для 1% агарозного гелю зважують 1 г порошку агарози в хімічній пов'язку або іншій системі утримування. Перенести обережно в лабораторну зону підготовки гелю.
У відповідній зоні приготування гелю вимірюють 100 мл буфера для електрофорезу. Він повинен бути при кімнатній температурі. Переносять порошок агарози в вогнестійку колбу і виливають виміряний обсяг буфера електрофорезу. Обережно нагрійте суміш в мікрохвильовій печі, але не кип'ятіть, тому що випаровування може змінити відсоток присутнього агарози. Переконайтеся в тому, що вся агароза розчинена, струсіть, ретельно перемішайте, дайте трохи охолонути, а потім додайте 0,5 мкг на мілілітр бромистого этидия. Не вдихайте будь-які пари, оскільки це може дратувати легені та тканини слизової оболонки. Крім того, не слід нагрівати розчин після додавання бромистого этидия. Збовтайте знову, щоб перемішати, а потім, поки розчин ще достатньо гарячий, щоб його можна було пролити, додати його в підготовлену основу. Зауважимо, що якщо присутній великий об'єм зразка або мала концентрація ДНК, то можна зробити більш товстий гель. Проте більш легкі гелі простіше аналізувати, тому що вони будуть більш чітко сфотографовані.
Вставте гребінки в гель, щоб створити канавки або свердловини для зразка. Дайте йому охолонути до кімнатної температури протягом декількох годин або в холодильнику на кілька хвилин. В останньому випадку, як тільки гель буде готовий, слід спостерігати присутність кристалів агарози. Як правило, вони зникають, якщо гелю дають нагрітися до кімнатної температури на стільниці протягом декількох хвилин перед використанням. Обережно вийміть гребінці, щоб не розірвати гель або зламати лунки. Агарозний гель тепер готовий до використання. Якщо його не використовувати негайно, його потрібно загорнути в целофан або зберігати в пластиковому контейнері в холодильнику, щоб запобігти його висиханню або плавленню.

Повідомлення

Реагенти, які використовуються, є можливими канцерогенами і повинні оброблятися обережно і адекватно. Якщо під час приготування гелю сталася помилка, вона ніколи не повинна повторно нагріватися, а виключатися, а новий гель готується знову.