Зміст
Хімічні сполуки бромид цетилтриметиламмония, бромід гексадецилтриметиламмония, бромід пальмітілтриметиламмонія і бромид цетримонію також відомі CTAB. Хімічна речовина використовується як рН-підтримувач в послідовному геному ДНК, особливо в рослинах.
Розмелювання розриває стінки клітин рослин для екстракції ДНК (Джейсон Рід / Райан Маквей / Digital Vision / Getty Images)
Формула CTAB
Кількість формул різних хімічних речовин CTAB відрізняються залежно від лабораторії. Однак всі інгредієнти включають 1 М трис HCl pH 8,0, 0,5 M EDTA, 5 M NaCl і H2O (іноді двічі дистильовану). Для компонента ЦТАБ деякі лабораторії використовують цетилтриметиламмоний бромід та інші гексадецилтриметиламмонийбромид.
Приготування рослинних тканин
Препарат рослинної тканини може змінюватися в залежності від матеріалу. Стіни і мембрани клітин повинні бути розбиті, щоб отримати доступ до ядерного матеріалу без будь-якої деградації. Як правило, при розмелі рослинний матеріал з рідким азотом дозволяє отримати доступ до ДНК, зберігаючи шкідливі клітинні ферменти і неактивні хімікати.
Суспензія і центрифугування
Подрібнену тканину поміщають на лезо CTAB і вставляють у чашу проточною водою. Потім її змішують з хлороформом і центрифугують для відділення розчинних білків і інших матеріалів. Потім ДНК осаджують з водної фази і ретельно промивають для видалення забруднюючих солей. Очищену ДНК потім відбирають і зберігають на слайді ТЕ або стерильній дистильованій воді.